在生物制藥領(lǐng)域，無(wú)菌過濾工藝是確保最終產(chǎn)品質(zhì)量和安全性的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一。其中，用于去除細(xì)菌和控制生物負(fù)荷的除菌過濾系統(tǒng)一直是無(wú)菌過濾工藝中的重要環(huán)節(jié)。
PUPSIT定義
根據(jù)EU 新版 GMP 的相關(guān)規(guī)定“8.87 The integrity of the sterilised filter assembly should be verified by integrity testing before use (pre-use post sterilisation integrity test or PUPSIT), to check for damage and loss of integrity caused by the filter preparation prior to use.”
PUPSIT，即“使用前、滅菌后完整性測(cè)試”（Pre-Use Post-Sterilization Integrity Test），是無(wú)菌制藥工藝中的一項(xiàng)重要測(cè)試措施。
由于滅菌過程可能會(huì)對(duì)過濾器產(chǎn)生影響，如導(dǎo)致微小破損、孔徑變化，或引入“掩蓋缺陷”的風(fēng)險(xiǎn)，PUPSIT幫助制藥企業(yè)在生產(chǎn)啟動(dòng)之前確認(rèn)過濾器是否能有效地過濾微生物和其他顆粒，確保產(chǎn)品的最終無(wú)菌性。
實(shí)施要點(diǎn)
1. 測(cè)試時(shí)機(jī)與流程設(shè)計(jì)
嚴(yán)格時(shí)序：必須在過濾器完成滅菌（如濕熱滅菌、輻照滅菌）后，且在實(shí)際使用（如藥液過濾、無(wú)菌工藝）前進(jìn)行，避免滅菌后二次污染或操作損傷。
無(wú)縫銜接：若滅菌后無(wú)法立即測(cè)試（如過濾器已安裝于系統(tǒng)），需確保測(cè)試前系統(tǒng)處于密閉狀態(tài)，防止外界污染。
2. 滅菌方法兼容性
濕熱滅菌（SIP）：需驗(yàn)證高溫高壓對(duì)濾膜（如PES、PVDF）的影響，避免膜孔徑變形或密封件老化。
輻照滅菌：注意γ射線或電子束可能降低濾膜機(jī)械強(qiáng)度，需通過完整性測(cè)試確認(rèn)無(wú)損傷。
環(huán)氧乙烷（EO）滅菌：需徹底解析殘留氣體，避免影響測(cè)試結(jié)果（如擴(kuò)散流測(cè)試干擾）。
3. 完整性測(cè)試方法選擇
起泡點(diǎn)測(cè)試（Bubble Point）：適用于膜孔徑較大（≥0.2μm）的除菌過濾器，需設(shè)定滅菌前后的閾值（如0.2μm濾膜起泡點(diǎn)≥3.5 bar）。
擴(kuò)散流/前進(jìn)流測(cè)試（Diffusion Flow）：更敏感，適用于小孔徑或多層濾膜，需根據(jù)濾膜材質(zhì)和滅菌條件校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)值。
壓力衰減測(cè)試（Pressure Hold）：適用于在線測(cè)試，需確保系統(tǒng)密閉性（如管路、接頭無(wú)泄漏）。
4. 測(cè)試系統(tǒng)設(shè)計(jì)
在線測(cè)試 vs. 離線測(cè)試：
在線測(cè)試：直接在生產(chǎn)系統(tǒng)中進(jìn)行，需驗(yàn)證測(cè)試設(shè)備（如完整性測(cè)試儀）與工藝管路的兼容性。
離線測(cè)試：適用于小型或獨(dú)立過濾器，需確保拆卸-測(cè)試-重新安裝過程的無(wú)菌性。
自動(dòng)化集成：優(yōu)先采用自動(dòng)化測(cè)試設(shè)備，減少人為操作誤差，確保數(shù)據(jù)完整性（如電子記錄符合ALCOA+原則）。
5. 驗(yàn)證與接受標(biāo)準(zhǔn)
滅菌前后對(duì)比：需建立滅菌前（出廠）與滅菌后（PUPSIT）的完整性測(cè)試數(shù)據(jù)基線，確認(rèn)滅菌過程未導(dǎo)致性能漂移。
接受標(biāo)準(zhǔn)：依據(jù)過濾器廠家標(biāo)定值，結(jié)合工藝驗(yàn)證數(shù)據(jù)設(shè)定（如擴(kuò)散流≤10 mL/min·cm2）。
失敗處理：若測(cè)試失敗，需啟動(dòng)偏差調(diào)查（是否為滅菌損傷、安裝不當(dāng)或測(cè)試誤差），并更換過濾器。
風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估與關(guān)鍵控制
風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)：滅菌參數(shù)超限（如溫度過高）、過濾器安裝不當(dāng)（如O型圈損壞）、測(cè)試環(huán)境（如非潔凈區(qū)操作）。
控制措施：通過工藝驗(yàn)證（如滅菌循環(huán)驗(yàn)證）、操作SOP培訓(xùn)、環(huán)境監(jiān)控（如粒子計(jì)數(shù)）降低風(fēng)險(xiǎn)。
法規(guī)與文件要求
GMP/FDA合規(guī)：符合FDA《無(wú)菌工藝指南》、EU GMP Annex 1（2022）要求，明確PUPSIT為強(qiáng)制步驟。
?歐盟GMP附錄1：2022年發(fā)布的新版附錄1明確要求，在沒有顯著工藝限制（如溶液體積較?。┑那闆r下，制藥企業(yè)必須在使用前對(duì)滅菌后的除菌過濾器進(jìn)行PUPSIT測(cè)試。這不僅是為了防止微生物污染，還因滅菌過程可能導(dǎo)致濾器的完整性下降，從而影響藥品的無(wú)菌質(zhì)量。
?美國(guó)FDA：FDA的相關(guān)指南雖然未明確要求所有情況下必須執(zhí)行PUPSIT，但強(qiáng)調(diào)根據(jù)產(chǎn)品特性進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，并在必要時(shí)執(zhí)行完整性檢測(cè)。對(duì)于那些無(wú)法在滅菌后實(shí)施PUPSIT的產(chǎn)品，需基于科學(xué)依據(jù)采取其他風(fēng)險(xiǎn)控制措施。
?WHO和PIC/S：全球化的GMP指南如WHO和PIC/S同樣支持PUPSIT，特別是針對(duì)出口或跨國(guó)銷售的無(wú)菌藥品，要求嚴(yán)格執(zhí)行PUPSIT的流程，以確保最終產(chǎn)品質(zhì)量達(dá)到國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)。
文件記錄：需完整記錄滅菌參數(shù)、測(cè)試結(jié)果、操作人員、設(shè)備編號(hào)等信息，支持產(chǎn)品批次放行。
審計(jì)重點(diǎn)：檢查測(cè)試數(shù)據(jù)趨勢(shì)分析、偏差記錄、過濾器更換頻率是否合理。
典型案例應(yīng)用
注射液除菌過濾：在線PUPSIT確保藥液過濾前過濾器完整性。
生物反應(yīng)器進(jìn)氣過濾器：滅菌后測(cè)試防止細(xì)胞培養(yǎng)污染。
無(wú)菌包裝器械：測(cè)試呼吸袋過濾器是否在EO滅菌后仍維持無(wú)菌屏障。
總結(jié)
PUPSIT是保障無(wú)菌工藝安全的核心環(huán)節(jié)，需通過科學(xué)的驗(yàn)證、嚴(yán)格的流程控制和合規(guī)的文件管理實(shí)現(xiàn)。實(shí)施時(shí)應(yīng)結(jié)合具體工藝特點(diǎn)（如滅菌方式、過濾器類型），確保測(cè)試結(jié)果的可靠性與重現(xiàn)性。
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